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糞便總RNA提取試劑盒

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糞便總RNA提取試劑盒說明書

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215K

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SN341 342 糞便總RNA提取試劑盒流程圖

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常見問題

一:RNA樣本篩選及儲(chǔ)存要點(diǎn)概述

RNA在細(xì)胞內(nèi)極易降解,樣本選擇時(shí)一定要選取新鮮的樣本組織或者取樣后迅速低溫處理(液氮速凍);樣本出現(xiàn)多次反復(fù)凍融后,RNA得率會(huì)嚴(yán)重下降,也會(huì)導(dǎo)致RNA降解;RNA提取環(huán)境要保持無RNA酶污染;

三:(RNA)離心柱漂洗完成后操作注意事項(xiàng)

離心柱漂洗完成后,盡可能烘干柱膜上殘留乙醇,殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率和下游實(shí)驗(yàn)效果;柱膜也不建議過度干燥,沒有乙醇味道殘留最好,如果過度干燥可能影響RNA溶解;如果A260/230值過低,說明樣本提取過程中漂洗不徹底,有鹽離子殘留,建議增加漂洗次數(shù);

四:RNA提取中A260/280比值分析:低于1.9的情況說明什么?

對(duì)于RNA提取,A260/280<1.9說明有可能存在DNA污染或者蛋白污染,如果洗脫樣本時(shí)沒有使用Buffer EB,而使用ddH20(確保無RNA酶),比值或偏低,因?yàn)?/strong>Ph值會(huì)影響吸光值,并不表示樣本純度低;

五:如何判斷RNA的完整性

RNA完整性可以通過超微量核酸檢測(cè)儀檢測(cè)或者瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件:膠濃度1%1XTAE電泳緩沖液)來判斷;一般樣本RNA電泳條帶為兩條帶,對(duì)于植物樣本,有可能存在葉綠體RNA干擾,條帶數(shù)量大于4條,并不表示RNA提取發(fā)生降解;

六:如何有效防止RNA污染?

RNA容易受到環(huán)境污染導(dǎo)致RNA嚴(yán)重降解,建議實(shí)驗(yàn)過程中注意更換實(shí)驗(yàn)手套,使用所有耗材應(yīng)該均無RNA酶的一次性耗材;

電泳環(huán)境受到RNA酶污染,也會(huì)造成RNA降解,電泳檢測(cè)不準(zhǔn)確,確保電泳過程中電泳緩沖液,上樣緩沖液無RNA酶污染;

七:植物RNA樣本處理量差異的處理方案

對(duì)于植物樣本,樣本處理量無法統(tǒng)一確定,對(duì)于一般樣本(煙草,擬南芥等),提取量不超過100mg鮮重組織或者20mg干重組織,對(duì)于復(fù)雜樣本(水稻,玉米,榆樹等),建議初始樣本量不超過50mg鮮重或者10mg干重組織;如果需要較高的RNA量,可以采取多管濃縮的方法提取RNA;

如果離心時(shí)堵塞離心柱,建議減少初始樣本量;

八:植物RNA樣本提取試劑盒選型指南

RNA提取一般是傳統(tǒng)TRIzol方法和改進(jìn)的柱式方法;對(duì)于TRIzol法進(jìn)本可以提取大部分樣本RNA,但是對(duì)于多糖多酚植物樣本,建議使用者盡量選擇具有針對(duì)性的試劑盒(參見目錄),傳統(tǒng)TRIzol法無法有效去除多糖多酚這些次生代謝物;

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